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技术贴:多重PCR技术要点解析

2023-07-07 14:31:33

文章来源:IVD学习笔记

信息来源:Super lab

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多重PCR概述




多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其基本原理与常规PCR相同,区别在于多重PCR反应体系加入一对以上引物,各对引物分别结合在模板相对应部位,最终扩增出一条以上目的DNA片段。



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多重PCR的特点




• 高效性:在同一PCR反应管内同时检出多种基因,或对有多个型别的目的基因进行分型,特别是微量样本的多基因检测。

• 系统性:多重PCR适宜于成组病原体的检测,如肝炎病毒,肠道致病性细菌,性病,无芽胞厌氧菌,战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检。

• 经济简便性:多种病原体在同一反应管内同时检出,将大大的节省时间,节省试剂,节约经费开支。


多重PCR应用

• 基因诊断、肿瘤诊断、病原微生物的检测。

• 基因分型、连锁分析。

• 植物分子育种、基因表达检测、病虫害检测。

• 病原菌污染检测。

• 区域捕获测序。


多重PCR之难

多重PCR并不是单纯的将多对特异性引物混合成一个体系。多重PCR之所以难,在于多个靶点之间扩增条件不兼容,每个靶点都需要旁边其他的引物配合。

就像是三人两足游戏一样,每个靶点成功扩增都是需要绑在一起的两个人(一对引物)默契配合。而多重PCR就需要所有的选手同时起跑又同时到达,并且所有的选手都达到最优发挥。


多重PCR优化

为了达到更好的扩增效果,一般可以通过以下几个方面进行优化。


◆ 引物的优化:



◆ 反应体系:


◆ 反应条件:


◆ 常见问题解决办法:


◆ 常见问题解决办法:

多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪,则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候,不应墨守成规,要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化,达到最佳扩增效果。


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