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多重pcr熔解曲线技术

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高灵敏·全预混·可冻干助力多重pcr熔解曲线技术!

病原体分型检测、病原体靶标多重检测以及耐药基因检测等检测方法,能够为精准风险分层、指导临床干预、优化筛查效率提供相应的临床依据。其中 HPV分型检测联合宫颈细胞学检查(如TCT) 更是成为宫颈癌防治的金标准工具。

呼吸道病原体感染的临床症状重叠度高,导致病原体鉴定周期长、操作复杂,使临床对多重核酸检测技术的需求愈发迫切。

多色荧光熔解曲线分析技术 (Multiplex Fluorescence Melt Curve Analysis , FMCA/MMCA) 是基于荧光PCR熔解曲线平台,采用双标记、自淬灭的TaqMan探针或分子信标,利用靶标序列与探针匹配的碱基数/碱基序列不同,获得不同的熔解温度Tm值,从而实现多基因、多位点的并行性检测,进行已知多病原体检测、基因分型以及突变检测的技术。

宝锐生物新推出产品M3291利用不对称扩增熔解曲线技术,采用无5’-3’外切酶活性的DNA聚合酶,避免探针水解,提高检测灵敏度,实现单管多重检测目的,有效助力病原体检测、耐药基因检测、生殖遗传筛查、食品安全检测等。

多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图

灵敏度测试

多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图
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图1:HPV 1×103copies/μL扩增检测 图2:HPV 10 copies/μL扩增检测

多重pcr熔解曲线技术 配图

表1 HPV 16重多色熔解曲线靶标信息

结 论

宝锐M3291对HPV 10copies/μL样本可进行准确分型检测。

稳定性测试-试剂稳定性

多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图
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图3:即时扩增效果 图4:预混液37℃加速14d扩增效果

结 论

宝锐M3291试剂可实现多靶标单管检测,且预混液37℃加速14d性能稳定。

稳定性测试-2-8℃全预混稳定性

https://qipeima.oss-accelerate.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/03/27ef78f6f0303c12bb5e4b43ff7e00967feddf5c.png?x-oss-process=image/format,webp
多重pcr熔解曲线技术 配图
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图5:液体试剂即时扩增效果 图6:液体试剂2-8℃放置7d扩增效果

结 论

宝锐M3291含引物探针配制成单管全预混试剂后,2-8℃放置7d,扩增性能稳定。

多重pcr熔解曲线技术 配图

冻干稳定性测试

多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图
多重pcr熔解曲线技术 配图

图7:液体试剂即时扩增效果 图8:冻干试剂55℃加速30d扩增效果

结 论

宝锐FM0301制备为冻干粉后,55℃ 1M后,整体基本稳定。

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多重pcr熔解曲线技术 配图
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