项目背景介绍
生物制品的生产中常用到动物细胞基质，而在细胞培养过程中，支原体感染发生率很高。研究发现，在全球范围内的可用细胞系中，其污染率大约是5–35%。当细胞被支原体感染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长一般并未发生显著的改变，因此支原体污染就难以察觉。
由于支原体比细菌要小的多，且没有细胞壁，大小在0.1-0.8μm，所以一旦污染，支原体很容易通过标准灭菌过滤器，随培养基或原料添加剂一起进入细胞培养过程或其他生物制品中。因此各国药典和药品监管法规对生物制品生产中的支原体检查都作出了明确规定。
传统检测支原体的方法需要培养至少28天才能得到结论，耗时较长。EP指南指出，如果NAT检测方法的灵敏度能达到与经典培养法相同的水平，并且具有良好的稳定性和特异性，则可以用NAT法替代经典培养法，作为支原体的检测方法。
珠海宝锐生物科技有限公司开发的支原体（Mycoplasma）DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法），可与宝锐生物核酸提取或纯化试剂盒I（磁珠法）配套使用，提供一个非常快速和易于使用的解决方案，适用于实验室或生产线上的支原体控制。
产品优势01灵敏度高
检测限达到5 CFU/mL（含106个细胞基质），验证检测了EP10-2.6.7中要求的支原体种类，可覆盖200多种支原体检测。对常见10种支原体标准株（5 CFU/mL）分别做24次提取并检测，检出比例均可达到24/24。
结果如表1所示：
表1 常见10种支原体标准菌株检测限数据汇总
02. 特异性强
验证27种与支原体的结构类似物和常用的细胞系的DNA（HEK293、HEK293T、MRC-5、CHO、NS0、Vero、Sf9、MDCK、E.coli、毕赤酵母、嗜酸乳杆菌、鲍曼不动杆菌、产气肠杆菌、肺炎链球菌、变异链球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、白色念珠菌、空肠弯曲菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞菌、肠沙门氏菌亚种、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、红曲霉素、丙酸杆菌、中间葡萄球菌等），均与支原体检测试剂无交叉反应。
03 操作便捷快速
1. 单管试剂，提取好的核酸直接加入PCR反应液中，无需多种组分混合。
2. 从样本提取到检测结束仅需1.5小时。
04. 适用性强
验证了多种基质样本类型，不同基质样本对检测灵敏度没有影响，尤其适用于高浓度细胞样本。
05. 体系可靠
1. 含内部质控（IC）和阳性质控（PC），有效避免假阴性和假阳性结果的出现。
2. 采用UDG酶防污染系统，避免污染风险。
06. 干扰评估
所用的8种基质样本（RPMI1640、10%FBS、PBS、10%马血清、支原体肉汤培养基、精氨酸支原体培养基、DMEM、AIM-V®mediumCTSTM等）对支原体检测试剂均无干扰。
07. 耐用性
1. 冻融稳定性：试剂盒反复冻融3次、5次、7次，支原体低值样本即检测限，检测结果为阳性，中值样本精密度CV≤5%，说明试剂盒冻融7次内，稳定性良好。
2. 精密度：检测支原体高、中、低值样本，各进行10个重复，其CV%均小于5%。
3. 仪器适用性：宝锐生物的支原体（Mycoplasma）DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）在ABI 7500、Bio-Rad CFX96、SLAN-96P、SLAN-96S、罗氏Light cycler 480 Ⅱ、博日FQD-96A等不同型号设备上均能正常检出。
参考文献：
1.《中国药典》2020版第三部-生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及质量控制。
2.《中国药典》2020版第四部-3301支原体检查法。
3.《欧洲药典》EP10-2.6.7 Mycoplasma。
4.《欧洲药典》EP10-2.6.21 Nucleic Acid Amplification Techniques。
5.《日本药典（JP第17版）》。
