mRNA加帽率检测前处理试剂盒

1. 尿素胶结果图

描述：在酶切和酶切回收后，使用尿素胶进行验证.

图1：酶解后（左）与回收后（右）的尿素胶电泳图

结论：洗杂回收后的片段经过Urea-PAGE 检测能够明显看到，除了目的条带和探针条带外的其他片段已被清洗干净。样品中探针的存在并不会对后续液质联用的测定产生影响，相反的，已知分子量的探针条带可以作为后续测定的标尺。

2. 检测前处理后的LC-MS结果图

描述：加帽率检测前处理后获得的结果图。

图2：试剂盒处理后的上机结果图.

结论：经加帽效率检测前处理试剂盒处理后的样品，其仪器读数图谱表现出高响应信号，且以目的峰单一。

3. 精密度实验

描述：合成相差一个碱基的两段RNA，作为uncap和cap的标准品。

图3 未加帽RNA检测结果

图4 加帽RNA检测结果

图5 将50%未加帽RNA 与 50% 加帽RNA混合，然后使用该试剂盒对混合物进行处理

图 6 将50%未加帽和50%加帽RNA先使用试剂盒处理，再按比例1：1混合

图7 将5%未加帽RNA 与 95% 加帽RNA混合，然后使用该试剂盒对混合物进行处理

图 8 将5%未加帽和95%加帽RNA先使用试剂盒处理，再按比例1：1混合

结论：加帽率检测结果显示，经过本试剂盒处理后的样品上机后结果显示不同比例混合的加帽与未加帽样品处理后与实际投料比差异系数小于5%，体现了本试剂盒准确度、灵敏度俱佳。

4. 试剂盒可操作性及重复性验证

描述：不同实验人员按照试剂盒操作手册进行同一样品处理。

图 9 实验人A前处理后样品LC-MS上机检测结果

图 10 实验人B前处理后样品LC-MS上机检测结果

结论：不同实验人员按照试剂盒操作手册进行同一样品处理，上机检测结果一致，说明宝锐加帽率检测前处理试剂盒易于上手操作，结果重现性好。

5. 试剂盒适用性验证

描述：本试剂盒可满足不同加帽方式制备的加帽样品的加帽率前处理：通过酶法加帽和不同帽类似物共转录加帽制备的样品使用本试剂盒进行前处理后，上机检测均能有效检出uncap与cap。

图 11 酶法加帽前处理样品LC-MS上机检测结果

图 12 共转录加帽前处理样品LC-MS上机检测结果

结论：结果表明宝锐加帽率检测前处理试剂盒适应性好，可满足不同加帽方式和帽类似物共转录的样品。