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直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速!

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前言

直接PCR(Direct PCR)是一种不经核酸提取而直接对生物样本进行扩增的反应,是目前分子诊断领域的热门技术之一。与常规PCR的主要区别在于,样本可不经过核酸抽提,直接进行PCR反应,因此对于参与直接PCR反应的酶的耐受性和buffer的兼容性有较高的要求

宝锐

直扩试剂稳定/灵敏/简便/兼容

传统的PCR反应需要以高质量的核酸为模板进行反应,如模板中有样本抑制物或提取试剂组分残留时就会抑制PCR反应的顺利进行。而宝锐生物推出的用于PCR直扩的核酸检测试剂含有创新型的独特配方,可对生物样本进行原位裂解、扩增,并保证结果的准确性。此技术大大降低了劳动强度,节约了人力成本和实验资源,提高了检测效率。

免提取 可冻干

全过程无加热、无核酸提取纯化。样本可直接作为模板上样进行qPCR检测,即混即用;可提供常规型/可冻干型/防污染体系配方,规格支持个性化定制。

更稳定 灵敏度高

HBV血浆/血清样本最低检测限为30IU/mL。

广泛适用 兼容性强

DNA/RNA均可进行直扩检测,兼容市面上常规荧光定量PCR仪器及快速荧光定量PCR仪

DNA直扩试剂

货号:MD2091

2×SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR)

2×SensiDirect Premix Buffer(dUTP) 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix

测试报告测试一

1. DNA直扩试剂(MD2091)进行HBV、内标基因双重检测;

2. 分别对比测试纯化模板、血浆模板和血清模板。

1. 实验方法

HBV纯化模板的加量为10µL/T(25µL反应体系),血浆模板和血清模板的加量为6.25µL/T(25µL反应体系)。

扩增程序

SLAN-96P:50℃ 2min;95℃ 5min;50 Cycles(95℃ 10s,55℃ 40s)。

2. 实验结果

扩增曲线

直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速! 配图

Ct值统计

直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速! 配图

结果分析

1. HBV血浆和HBV血清样本扩增效果相当。

2. 从Ct值上看,HBV纯模板扩增较HBV血浆或血清模板提前,但由每孔的当量模板量来计算,HBV纯模板扩增效率与HBV血浆或血清模板相当。

测试二

DNA直扩试剂(MD2091)测试HBV血浆模板的线性范围,评价试剂扩增效率。

1. 实验方法

HBV血浆模板设置:1.6×10⁷IU/mL,2T;1.6×10⁶IU/mL,2T;1.6×10⁵IU/mL,2T;1.6×10⁴IU/mL,2T;1.6×10³IU/mL,2T;

加样量:6.25µL/T(25µL体系)。

扩增程序

SLAN-96P:50℃ 2min;95℃ 5min;50 Cycles(95℃ 10s,55℃ 40s)。

2. 实验结果

扩增曲线

直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速! 配图

Fam通道标准曲线:

直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速! 配图

Ct值统计

直扩系列一:宝锐生物PCR直扩试剂,让分子诊断更简单快速! 配图

结果分析

标准曲线相关系数-0.99967,相关性良好,结果可靠。试剂扩增效率99.045%,表示HBV血浆各浓度梯度的复孔重复性好、不同浓度的模板扩增效率较为一致,实验结果稳定可靠、可重复性好。

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本系列未完待续,下期更精彩!

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