重组蛋白技术的原理是利用 DNA 重组技术，将外源蛋白基因连接到合适的表达载体并通过宿主细胞的生物机制使其表达进而得到理想的重组蛋白。重组蛋白表达通常会通过添加融合标签的方式来提高目的蛋白的溶解性和促进目的蛋白的折叠等，根据实际需求，某些融合标签需要被去除。在获得目的蛋白前，需要特定的蛋白酶将融合标签切除。常用的蛋白酶有肠激酶、凝血酶、Factor Xa等，它们的酶切最适温度在25-37℃，此温度范围会使得一些目的蛋白被非特异性酶切。
表1.常见的用于切除标签的蛋白酶
人鼻病毒(HRV)是单股正链小RNA病毒，其编码的3C蛋白酶属于半胱氨酸蛋白酶家族，HRV 3C蛋白酶能特异性地识别七肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly，并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切，主要用于切除融合蛋白的标签，如GST、His等。
宝锐生物的HRV 3C蛋白酶突变体，分子量40kDa，可识别切割LEVLFQ↓G，酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly氨基酸残基，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。宝锐HRV 3C也可以识别切割LEVLFQ↓M位点。
图1.HRV 3C 蛋白酶识别切割序列
宝锐生物利用基因工程表达的HRV 3C Protease的最佳酶切温度是4℃，特异性强，酶切后的产物清晰，与主流品牌的产品酶切效果相当。
不同酶量下切割100µg底物蛋白效率验证：
取宝锐生物和N公司HRV 3C Protease按照4U、2U、1U的酶投入量，4℃反应过夜后取样做SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。反应体系如下：
备注：substrate protein为融合蛋白-LEVLFQ↓G-目标蛋白，约66kDa，使用HRV 3C Protease 酶切后会获得约40kDa的融合蛋白和26kDa的目标蛋白。
宝锐 HRV 3C Protease的表现力与进口N公司的产品相当。
宝锐生物 HRV 3C Protease在4℃ 过夜的条件下能够完成底物蛋白的切割，酶切产物清晰，酶切产物的条带与进口N公司的产品一致，无非特异性切割。
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