如何预防和处理PCR检测实验室的核酸污染？

文章来源：原博士带你做检测

核酸检测实验室想完全杜绝核酸污染是不可能的。核酸检测实验室的管理者和实验人员必须要认识到核酸污染是不可避免的，但是污染的频率和概率是可控的。我们要做的是时刻保持警惕，尽最大努力将污染的概率降到最低，并且能第一时间发现污染并及时进行处理。

先说说有史以来影响最大的实验室核酸污染事件：

当地时间2020年4月18日，《华盛顿邮报》(Washington Post)爆了一则重磅新闻，美国CDC在实验室生产的新冠病毒检测试剂出现了污染问题，导致全美的核酸检测推迟最少一个月。1月21日，CDC已经“确定开发”了新冠病毒的检测方法，并使用它来确认美国的第一例新冠病例，1月下旬，美国CDC对26个公共卫生实验室发放新冠病毒试剂盒，有24个实验室出现了假阳性反应。

CDC紧急召回了诊断试剂，直到3月2日，CDC的新冠病毒试剂由Integrated DNA Technologies，IDT公司生产重新投入使用。这起实验室污染的代价是美国错过了黄金的疫情防控窗口，数万甚至数十万普通民众死亡。每一个实验室都应该把这个教训铭记在心，时刻提醒自己，核酸污染随时都可能发生，无论什么级别的实验室都可能发生。

核酸污染的预防措施

1.实验室布局

核酸检测实验室的布局是预防污染的根本，合理布局可以大大降低污染的概率。一般情况分为四个区分别为试剂准备区，标本制备区、核酸扩增区和产物分析区。对于不需要电泳的荧光定量PCR，核酸扩增区和产物分析区可以合并。每个区应独立通风，可控制空气流动方向。

有些核酸检测实验室在实验室建设时未考虑到核酸扩增需求，就是按照普通实验室建设。这种情况下，个人建议扩增和产物分析区应远离试剂准备区和标本制备区，尽量不在一个楼层或者不在一个区域。最忌讳的是几个实验室紧挨着，甚至门对门。

2.每个区域的物品专用

四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必须有明确的标记，以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。

3.人流物流单向流动

进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。

4.人员培训管理
再好的实验室设计，如果实验人员不遵守规程，一切都是徒劳的。加强实验室人员的培训和管理至关重要。

5.质控 

阴性质控：实验室的核酸污染风险跟检测量正相关，因此在检测活动比较频繁时需要多添加阴性质控，包括阴性样品，阴性提取对照，阴性扩增对照，无模板对照，甚至可以使用反应体系，引物探针和提取试剂等作为对照以检验检测流程和反应系统组分的污染。阴性对照可以使用几个随机插入检测样品。保证出现污染可以第一时间发现。

阳性质控：避免或减少使用过强的质粒阳性对照。

6.PCR产物的处理
有一些规范建议PCR产物使用1mol/L盐酸浸泡，我认为这极易造成PCR产物的暴露和扩散，具有很高的风险。还有一些实验室从生物安全的角度将所有的实验废弃物全部高压，我也是不建议的，因为PCR产物没有生物安全风险，高压会造成PCR产物扩散，对实验室的污染风险更高。个人建议对于PCR产物，进行表面消毒后按照普通医疗废弃物处理即可。

核酸污染的处理措施

发现污染第一步就是要暂停实验，评估假阳性对以往检测结果的影响。对实验进行彻底打扫和清理，尽可能更换相关的试剂耗材，对仪器设备进行清洁和去核酸处理。所有人员回家洗澡换衣服。

1.化学处理法

使用商品化的DNA去除剂

1 mol/l的盐酸和各种化学物质去降解DNA。