项目背景
腺相关病毒 (Adeno-associatedVirus，AAV) 是目前基因治疗领域最广泛使用的病毒载体之一，因其安全性高、长期表达稳定、低免疫原性等优势，已成为遗传病、神经退行性疾病、眼科疾病等治疗的首选递送工具。AAV属细小病毒科无包膜的线状DNA病毒，只有在辅助病毒 (通常是腺病毒、单纯疱疹病毒等) 存在下才能进行病毒复制。
重组腺相关病毒 (RecombinantAdeno-associatedVirus，rAAV) 是在野生型AAV基础上改造而成的基因载体。通过删除野生型AAV的rep和cap基因，仅保留反向末端重复序列 (ITRs) ，并在其中插入治疗性基因表达盒改造而成。
复制型腺相关病毒 (ReplicationCompetentAAV，rcAAV) 是在rAAV载体生产过程中，因rep/cap基因与ITR发生非同源重组，形成了具有复制能力的AAV，即复制型腺相关病毒。rcAAV虽然粒与目前已知的人类疾病无直接关联，但作为一种污染物，会增强或干扰治疗用rAAV 的作用效果或者导致rAAV载体基因序列的漂移 ，影响其基因组稳定性以及体内转导效率等。因此，规模化生产过程中监测和产品放行时检测rcAAV十分重要。
法规要求
国家药品监督管理局药品审评中心(CDE)发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中强调基于质量研究和关键质量属性的鉴别建立完善的质量控制策略。病毒载体制备工艺中，针对出现可复制型病毒的潜在风险建立控制策略，如，对生产过程中适当阶段的样品或终产品进行可复制型病毒的检测等。
在《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则》中提到，采用复制缺陷病毒载体的基因治疗产品，需要评估在生产的过程中是否有可能产生复制型病毒。
产品特点
宝锐生物rcAAV-2/N检测试剂盒 (PCR-荧光探针法) ，包含两个体系：检测rcAAV的体系和检测rAAV的体系；试剂盒校准品为经数字PCR技术定值后的即用型校准品，无需使用前稀释，可同时实现对rcAAV和rAAV快速、灵敏、特异的定量检测。
该试剂盒具有以下特点：
重复性 (分析内精密度)、中间精密度 (仪器间、天间、人员间、试剂批间) 及再现性 (总不精密度) ，定量限CV≤20%，中高浓度CV≤15%。
与HEK293、Sf9、Hi5、CHO、大肠杆菌、毕赤酵母、Vero等常用细胞系无交叉反应。与金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、分枝杆菌等无交叉反应。
1. 单管PCR试剂，方便取用，无需使用时配剂；
2. 校准品无需稀释，成品组装，方便快捷；
3. 从样本提取到检测结束，仅需1.5小时左右。
采用UDG酶防污染系统，有效避免扩增产物污染风险。
引入内部质控(内标) ，监控提取扩增全流程，提高检测质量。
校准品溯源到数字PCR，量值准确。
试剂盒反复冻融3次、5次、7次、10次，试剂性能不受影响。
在ABI7500、ABlQuantStudio™5、Bio-RadCFX96、SLAN-96P、SLAN-96S、罗氏Lightcycler480Ⅱ等不同型号设备上性能均不受影响。
相关产品
rcAAV-2/N检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
参考文献：
1.《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》
2.《基因治疗产品非临床研究与评价技术指导原则》
