

免疫印迹又称蛋白质印迹 (Western Blot, WB),是一种综合性的免疫学检测技术。利用 SDS-PAGE 技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开,然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上,以固相膜上的蛋白质作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显色或荧光成像等方法以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白质。该技术已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。



1.
最大限度的增加信号强度★
2.
最大限度的降低背景强度★
3.
最大限度的节省实验时间★



01
裂解模块
WB
RIPA Lysis Buffer (Strong, Medium and Weak)
RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay) Lysis Buffer是一种传统的细胞组织快速裂解液,主要用于从动物细胞和组织中提取可溶性蛋白,其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP及Elisa等实验。
RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。

裂解液选择图
Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail
细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
宝锐生物蛋白酶和磷酸酶抑制剂核心组分如下表:


02
蛋白定量模块
WB
Bradford Protein Assay Kit
Bradford 蛋白浓度测定方法,是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。
其原理是考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸结合后会产生蓝色化合物,该物质最大吸光值波长为595 nm,吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,可推算出蛋白浓度,从而实现蛋白浓度的快速测定。
1.
高灵敏度★
本产品对传统的Bradford 方法进行了改良,最佳蛋白含量检测范围为 100~500 μg/mL,灵敏度高。
2.
去垢剂耐受性高★
可耐受NP-40、Triton X-100、Brij35和Tween 20等各种常用去垢剂。
3.
方便快捷★
试剂盒配备有一系列梯度浓度的蛋白质标准品溶液 (BSA 溶液 ),即取即用,无需稀释,方便快捷。
BCA Protein Quantification Kit
本试剂盒系依据蛋白质分子在碱性溶液中将 Cu2+还原为 Cu+,2,2’-联喹啉-4,4’-二羧酸(BCA)与 Cu+结合形成紫色复合物,在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比,以蛋白质标准品溶液作标准曲线,采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。
1.
标准品线性关系稳定★
标准品线性拟合方程 R2≥0.99。
2.
精密度高★
标准品、供试品检测复孔 RSD%≤10%。
3.
准确度高★
企业自制内控品检测误差≤10%。
03
蛋白电泳模块
WB
Tris-Glycine-SDS Running Buffer
Tris-Glycine-SDS Running Buffer常用作蛋白质SDS-PAGE的电泳缓冲液。本缓冲液是10倍浓缩液,在使用前只需用去离子水稀释到1×工作液即可。
1.
操作简单★
直接用蒸馏水或去离子水稀释至1×即可使用。
2.
使用范围广★
常用的蛋白电泳缓冲液:适合Tris-甘氨酸体系。
5×SDS-PAGE Protein Loading Buffer
本品属于变性还原型蛋白上样缓冲液。
1.
抑制降解★
采用新型配方,确保煮样后pH值为中性,避免蛋白降解。
2.
无异味★
采用新型还原剂,在保证强效还原性的同时,避免了β-巯基乙醇或DTT的臭味。
3.
沉降迅速★
样品会快速沉到加样孔底,不易飘起。
4.
快速融化★
从-20℃取出后融化速度快,不粘稠,节省等待时间。
One-Step PAGE Gel Fast Preparation Kit
本产品适用于Tris-甘氨酸电泳体系,采用上层胶和下层胶的预混配方,只需加入改良型促凝剂即可凝胶,简便快捷。所配的上层胶带有蓝/红色,点样孔清晰易辨,方便点样。蓝/红色浓缩胶可用于区分含不同样品的凝胶。本产品配套提供改良型促凝剂,具有更好的稳定性和催化效能,配胶过程中无需额外添加TEMED。

1.
一步法灌胶★
灌制下层胶后直接注入上层胶,无需液封。
2.
操作简单快速★
无需计算所需溶液量,无需稀释。
3.
彩色上层胶★
可制备红蓝两种颜色的上层胶,为点样和区分不同凝胶提供便利。
4.
避免异味★
无需使用TEMED,避免恶臭气味。
5.
条带清晰★
尤其小分子蛋白质条带比在传统凝胶中更清晰。
6.
无需特殊电泳液★
匹配传统Tris - Gly电泳缓冲液。

04
预染蛋白Marker模块
WB
180 kDa Prestained Protein Marker
180 kDa Prestained Protein Marker由三种颜色预染的10种不同分子量大小的蛋白质组成,分子量范围为13~180 kDa。其中75 kDa为橙红色条带,13 kDa、17 kDa、36 kDa、45 kDa、60 kDa、100 kDa、140 kDa、180 kDa为蓝色条带,25 kDa为绿色条带。本产品用于SDS-PAGE实验中,可清晰地指示电泳进程,较为准确地判断目标蛋白的分子量;在Western blot实验中,可用于监测PVDF膜或NC膜的转膜效果以及判断目标蛋白的检测情况;本产品可应用于Tris-Glycine胶和Bis-Tris胶的不同缓冲液体系(Tris-Glycine、MOPS和MES),本产品的蛋白条带均经非预染蛋白Marker校准,条带大小准确。
1.
彩色条带,方便判断各个条带的准确位置。
2.
可清晰地指示电泳进程。
3.
用于检测WB实验的转膜效率。

05
转膜和孵育模块
WB
10× Fast Transfer Buffer
10× Fast Transfer Buffer是专为Western Blot湿法快速转膜设计的一款高效、安全、无毒的快速转膜缓冲液,本品是10倍浓缩缓冲液,使用前需以适量去离子水和乙醇稀释至1×浓度。
1.
安全环保★
本产品不含毒害成分,配置过程可用无水乙醇替代甲醇,避免使用甲醇等剧毒试剂,操作更安全环保。
2.
高效便捷★
本品使用高效便捷,20~40 min 即可完成 Western Blot 湿转法转膜,且转膜过程中产热量小,转膜时内置冰盒即可,无需外置冰浴。
3.
兼容性好★
对于分子量跨度大的蛋白同样适用,有效解决大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题,兼容Tris-Gly体系,Hepes体系,Bis-Tris体系等多种凝胶。

0.45 μm /0.22 μm PVDF Membrane
PVDF膜,即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride),是蛋白质印迹法中广泛应用的一种固相支持物。该膜具有疏水性,膜孔径大小不一,随着孔径的逐渐减小,其对低分子量蛋白的结合能力越发牢固。
1.
低背景,灵敏度高。
2.
高化学兼容性。
3.
对气体和液体的高耐渗透性。
4.
耐热稳定性好。
0.45 μm /0.22 μm NC Membrane
NC Membrane即硝酸纤维素膜,是蛋白和核酸杂交最常用的印迹膜。NC膜具有亲水性,无需在甲醇、乙醇中活化,仅需在转移在水中简单润湿。其均匀的孔隙结构能够结合生物分子,主要用于免疫印迹(Western blot),可以将蛋白质从各种凝胶基质转移到膜上。
1.
无需甲醇活化。
2.
蛋白结合能力强。
3.
减少非特异性的结合,降低杂交背景,无需高严谨度的洗脱步骤。
4.
高性价比。
10×TBST Buffer
10×TBST Buffer是一种生物学实验中广泛应用的等渗缓冲盐溶液,主要用于Western Blot实验中洗去膜上非特异性结合的抗体等试剂,以降低背景,增强信噪比。
本品适用于免疫荧光 (Immunofluorescence, IF)、免疫组化 (Immunohistochemistry, IHC) 和免疫细胞化学 (Immunocytochemistry, IC) 等实验中的封闭液配制、一抗或二抗的稀释与孵育后洗涤等环节。
1.
以降低背景,增强信噪比。
2.
适用所有抗体稀释 (IF, IHC, IC,ELISA,WB)。
3.
不含BSA,脱脂奶粉等动物源蛋白。
06
显色模块
WB
DAB Peroxidase Substrate Kit
DAB Peroxidase Substrate Kit是宝锐生物研发的HRP-DAB底物显色试剂盒产品。
本产品含有检测辣根过氧化物酶(HRP)的所有试剂。适合于Western Blot杂交的PVDF膜、NC膜的染色。DAB(3,3′N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride)是辣根过氧化物酶(HRP)的常用底物,在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生不溶于水和乙醇的棕色沉淀。经免疫反应固定的HRP可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为棕色化合物,可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。
1.
组分简化,操作简单★
宝锐生物DAB Peroxidase Substrate Kit 由DAB-A和DAB-B两个组分组成,组分简化,操作简单。

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