精准检测，助力mRNA产业新突破！

近年来mRNA疫苗技术进入了迅速发展的时代，T7 RNA Polymerase作为催化酶被用于mRNA疫苗的生产过程。然而该添加物的微量残留会影响产品质量，影响其后续使用效果。产品市售前需对其工艺中的添加物进行残留检测，以保证产品的质量。因此，在整个生产过程中，质量控制至关重要。

然而，T7 RNA Polymerase残留活性检测的方法较少，主要包括放射性同位素法、分光光度法、荧光淬灭方法等等，然而上述方法难以实现高通量，同时需合成特定的寡聚核糖核酸分子作为作用底物，而且还需要设计合成特定带修饰的RNA探针，成本较高；或是易产生放射性污染，或是步骤多、周期长。

关于T7 RNA Polymerase的残留检测新方法中，中国发明专利CN202110755117 .0公开了一种具有信号放大效应的可视化检测爆炸物分子的生物传感器及其制备方法和应用，通过将T7 RNA Polymerase与生物传感器结合，通过 T7 RNA Polymerase与受体的结合将化学信号转化为电信号检测T7 RNA Polymerase的含量，检测操作简单，方便，但是生物传感器的信号不稳定，各个样本之间的差异性较高。专利US5827661A公开了一种新颖的检测方法，通过采用RNA聚合酶发生链式扩增，从而可以放大检测时的信噪比，使检测具有更低的检出限，但其检测时间周期长，准备工作复杂，受检测环境、人员操作影响较大，整个物料准备、检测过程复杂，且出错率高。而酶联免疫法检测，其操作简单，检测时间短，可以短时间检测多个样品，且准确率相对较高，极大地便利了mRNA疫苗相关产品的质检工作[1]。

1. 单克隆抗体简介

单克隆抗体 (monoclonal antibody)应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，通过HAT、HT筛选，ELISA检测，有限稀释法亚克隆，筛选出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞产生的抗体，就是单克隆抗体 [2]。单抗具有高特异性、高均一性、高效性和无限供应性，被广泛应用于免疫学、医学、生物学等领域，包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面。

2. 单克隆抗体技术发展历程

在20世纪70年代，B细胞癌多发性骨髓瘤被发现。据了解，这些癌性B细胞都产生单一类型的抗体(一种病变蛋白)，这被用来研究抗体的结构，但还不可能产生对特定抗原有特异性的均一抗体 [3]。

1975年英国科学家Milstein和Kohler发明了单克隆抗体技术，他们成功将骨髓瘤细胞系与B细胞融合，创造出能产生抗体的杂交瘤，并因此获得1984年诺贝尔医学奖[4]。

1986年，英国生物化学家格雷格·温特（Gregory P. Winter）和他的团队开创了人源化单克隆抗体的技术 [5]，消除了许多单克隆抗体在一些病人身上引起的反应。因此获得2018年诺贝尔化学奖。

2018年，美国免疫学家詹姆斯·艾利森（James P. Allison）和日本免疫学家本庶佑（Tasuku Honjo）发现了通过使用抑制性连接的单克隆抗体可抑制负面免疫调节，从而进行癌症治疗。因此获得诺贝尔生理或医学奖。[6]

单克隆抗体技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题，可用于探讨：

①蛋白质的精细结构；

②淋巴细胞亚群的表面新抗原；

③组织相容性抗原；

④激素和药物的放射免疫（或酶免疫）分析；

⑤肿瘤的定位和分类；

⑥纯化微生物和寄生虫抗原；

⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 ( “导弹”疗法，利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究。）

几十年来，杂交瘤技术作为常规的单克隆抗体制备技术发展成熟，应用时间长，目前批准用于治疗用途的抗体中有 90% 以上是由该技术产生的。

参考文献：

[1] mRNA疫苗质量分析程序——指南草案. 美国药典（USP）第二版. 2023.04.

[2] 单克隆抗体的制备过程．生物帮资讯．2012-05-22.