在 IVT 反应过程中生成的副产物 dsRNA 会强烈刺激细胞内 RNA 受体，触发天然免疫信号。宝锐生物自主研发并进行多级纯化后的 T7 RNA Polymerase 3.0 针对不同模板、不同核酸类型，均具有较高的转录催化活性。相较于普通T7 RNA 聚合酶，T7 RNA Polymerase 3.0 转录生产的副产物 dsRNA含量显著降低。T7 RNA Polymerase 3.0 能够精确识别 T7 启动子区域(5'-TAATACGACTCACTATAG-3')并从此区域的G开始，将后序的 DNA 序列转录成单链 RNA，以天然核苷酸或修饰核苷酸为底物，通过短时间的体外转录孵育，在合适的反应缓冲体系下，用户能通过该酶高效地从 DNA 获得大量的 RNA产物。
1. 有效控制dsRNA产生。
2. 转录兼容性广：适用于不同长度的线性化模板以及不同核苷酸类型的转录。
3. 转录样品完整性高。
4. 转录持续高效。
5. 转录驱动力强：转录过程中对Mg2+依赖性低。
6. 产品稳定性好。
溶液澄清透明，无可见异物。
无核酸外切酶、 核酸内切酶活性。
蛋白纯度≥95%。
无DNase、RNase活性。
——【GMP】
产品名称：T7 RNA 聚合酶 货号：BP- E01
产品名称：RNase Inhibitor 货号：BP- E02
产品名称：无机焦磷酸酶 货号：BP- E03
产品名称：DNase Ⅰ 货号：BP- E04
1. 检测转录产物中的双链RNA（dsRNA）含量
描述：采用 ELISA 对转录产物中的 dsRNA 含量进行精确定量，从而验证了 T7 RNA 聚合酶 3.0 GMP 级（低 dsRNA）在转录过程中对 dsRNA 的调控能力。
图 1 不同供应商提供的 T7 RNA 聚合酶转录产物的 dsRNA 含量结果（左：2000 nt；右：5000 nt）。
结论：双链RNA含量分析表明，在转录不同长度的线性化模板时，T7 RNA聚合酶3.0 所产生的双链RNA含量较低；与野生型T7 RNA聚合酶产生的双链RNA含量相比，该酶产生的双链RNA水平降低了7–8倍。与来自其他供应商的T7突变体产品相比，本产品在控制双链RNA生成方面更具优势。
2. 模板兼容性测试
描述：验证 T7 RNA 聚合酶 3.0 在转录过程中与不同长度及不同核苷酸类型的模板之间的兼容性。
图 2 T7 RNA聚合酶3.0 在不同长度模板中的转录性能结果
图 3 T7 RNA聚合酶3.0 用于评估经修饰与未经修饰的mRNA的转录性能
结论：产率分析表明，在使用不同长度及不同核苷酸类型的线性化模板进行转录时，采用 T7 RNA 聚合酶 3.0所产生的转录本产率仍保持较高水平。
3. 转录产物完整性检测
描述：采用毛细管电泳法对 T7 RNA 聚合酶 3.0 转录产物的完整性进行了验证。
图 4 检测mRNA样本完整性的毛细管电泳分析结果（三种不同长度）
结论：毛细管电泳数据表明，T7 RNA聚合酶3.0的转录产物具有较高的完整性。
4. 酶活动力曲线
描述：探究T7 RNA聚合酶3.0 在不同转录时间点的转录效率。
图 5 酶活动力曲线结果
结论：在转录不同长度的线性化模板时，T7 RNA聚合酶3.0 可维持持续的高转录效率。
5. 转录驱动力验证测试
描述：验证 T7 RNA 聚合酶 3.0 在转录过程中对转录反应缓冲液中 Mg²⁺ 的依赖性。
图 6 T7 RNA聚合酶的Mg²⁺依赖性检测结果
结论：实验结果表明，Biori T7 RNA聚合酶3.0在相对较低的工作Mg²⁺浓度（例如20 mM）下仍能保持强大的转录驱动能力，其性能优于供应商提供的T7 RNA聚合酶。这表明T7 RNA聚合酶3.0 对Mg²⁺的依赖性较低。
6. 稳定性测试
描述：将 T7 RNA 聚合酶 3.0 在 37℃ 下长期储存后，通过体外转录实验对其稳定性进行了验证。
图 7 T7 RNA聚合酶3.0在37℃储存后的转录结果
结论：在37°C条件下进行为期7天的加速处理后，T7 RNA聚合酶3.0 GMP 级（低双链RNA）仍能保持较高的转录产率。
