FastAmpli RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) 是荧光定量(TaqMan探针法)RNA扩增检测的专用试剂,含有经基因改造筛选得来的快速扩增的逆转录酶及DNA聚合酶,能在20~40 min内完成PCR反应。本品具有较强的抑制物耐受性,具有更高的反转录和PCR扩增效率,适合于低浓度RNA模板的高灵敏度扩增,在较宽的定量区域内均能得到良好的标准曲线,准确进行定量。
本试剂采用抗抑制扩增酶与UNG酶的混合酶,以及含有dUTP的优化Buffer体系,不但能够实现含抑制物样品中目的基因的良好扩增,而且可以有效防止PCR产物残留、气溶胶污染所带来的假阳性反应。
本品与多数厂家的荧光定量PCR仪兼容,如Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad和Roche等。


1. 10×FastAmpli RTase/UNG Mix
2. 5×FastAmpli RT Premix Buffer (dUTP) (Mg2+ free) (DG)
3. 25×MgCl2

1.扩增速率不低于1kb/10s,适⽤于纯 化RNA的快速荧光定量PCR,最快30 min内完成检测。
2.具有优异的特异性和灵敏度。

1.人和动物相关的RNA病毒检测。
2.基因组RNA的扩增与分型检测。
3.快速扩增检测。
1. M5144加速稳定性评价
实验条件:
产品货号 | M5144 |
反应体系 | 人总RNA三重检测体系 |
模板浓度 | 0.233、2.33、23.3 pg/ul |
反应程序 | 50℃ 15min;95℃ 1min;50 Cycles(95℃ 15s,56℃ 45s) |
实验结果:

小结:M5144试剂放置在37℃加速7天、14天后,扩增性能与未加速试剂一致,能够保持稳定。
2. M5144冻融稳定性评价
实验条件:
产品货号 | M5144 |
反应体系 | 人总RNA三重检测体系 |
模板浓度 | 23.3、2.33、0.233 pg/uL; |
反应程序 | 50℃ 15min;95℃ 1min;50 Cycles(95℃ 15s,56℃ 45s)。 |
实验结果:
小结:M5144预混液试剂在冻融5、10、15、20 次后,扩增性能与未冻融试剂一致,能够保持稳定。
3. M5144快速扩增评价
实验条件:
产品货号 | M5144 |
反应体系 | HCV-MLN双重检测体系 |
模板浓度 | 2.6E4 、2.6E3、130 IU/mL; |
反应程序 | 快速程序:50℃ 5min;95℃ 1min;50 cycles (95℃ 1 s,62℃ 10 s)。 |
实验结果:

小结:M5144试剂在快速扩增程序下可稳定检出HCV-MLN模板,可适用于快速扩增。
4. M5144扩增效率测试
实验条件:
产品货号 | M5144 |
反应体系 | 人总RNA检测体系 |
模板浓度 | 2320 pg/ul、232 pg/ul、23.2 pg/ul、2.32 pg/ul、0.232 pg/ul; |
反应程序 | 50℃ 15min;95℃ 1min;50 Cycles(95℃ 15s,56℃ 45s)。 |
实验结果:


小结:M5144试剂在宽广的模板浓度区间内具有优异的线性关系,扩增效率良好,定量结果重复可靠。
5. FM5144冻干加速稳定性(55℃)验证
实验条件:
产品货号 | M5144 |
反应体系 | 人总RNA三重检测体系 |
模板浓度 | 0.233、2.33、23.3pg/ul;10μl/T |
反应程序 | 50℃ 15min;95℃ 1min;50 Cycles(95℃ 15s,56℃ 45s)。 |
实验结果:

测试方法:将冻干样品置于55℃加速30d后,以液体试剂作为对照,进行对比测试。
小结:PFM5144-O25 55℃加速 30d,扩增性能与液体试剂一致,能保持稳定。