VellixClonTM Ambient Seamless Cloning Mix是一款专为单片段定向克隆打造的新一代无缝克隆试剂。基于自主研发的室温同源重组酶体系，室温（23-30℃）反应，减少了传统无缝克隆对PCR仪、水浴锅等温控设备的依赖，可直接在实验台面上完成克隆反应。
本品采用预混液形式，较传统缓冲液和酶的双组分体系，简化加样步骤，加样误差同步降低，以获得稳定可重复的实验结果。10 μL反应体系设计相较于传统的20 μL反应体系试剂消耗减半，尤其适合小批量预实验和高通量筛选场景。
本产品适用于0.1–10 kb片段的定向克隆，室温（23-30℃）反应5min即可完成同源重组，相较于传统反应时长30 min大幅提速，可在较短时间内完成常规片段的重组反应，显著简化克隆流程；此外，本品具有较宽的DNA投入量适用范围，在扩增产物单一、无明显非特异性条带时，可兼容PCR产物未纯化，从而简化实验步骤。可实现任意载体、任意位点的精准克隆。VellixClonTM Ambient Seamless Cloning Mix可应用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变等领域。
1. 室温快速：
本产品适用于0.1–10 kb片段的定向克隆，室温（23-30℃）反应5min即可完成同源重组，相较于传统反应时长30 min大幅提速，可在较短时间内完成常规片段的重组反应，显著简化克隆流程。
2. 兼容低投入和未纯化：
具有较宽的DNA投入量适用范围，在扩增产物单一、无明显非特异性条带时，可兼容PCR产物未纯化，从而简化实验步骤。
3. 适用单片段场景：
一款专为单片段定向克隆打造的新一代无缝克隆试剂，针对单片段优化，尤其适合短片段，应用边界清晰。
快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变等领域。
1. 反应温度测试
结论：单片段无缝克隆试剂BR1C103具有较宽的反应温度范围，室温23℃-30℃范围内均可反应，综合不同片段长度的菌落数和阳性率，将25℃作为该试剂较通用的反应温度。
2. 反应时间测试
结论：单片段无缝克隆试剂BR1C103可在室温快速反应条件下完成不同长度插入片段的单片段克隆。1 kb 片段在 5-30 min 内均保持高效克隆；4 kb 和 10 kb 片段也可在短时间反应下获得有效克隆结果。数据表明，BR1C103 适用于不同长度片段的室温快速无缝克隆。
3. 低投入量测试
结论：单片段无缝克隆试剂BR1C103具有良好的低投入量兼容性。当载体或插入片段单独降低至常规投入量的1/10时，仍可获得充足菌落，并保持较高阳性率；在常规及同步低投入条件下，其整体性能与对比产品相当。对于极低投入量，特别是较长插入片段投入不足的情况，建议适当增加DNA用量，以保证稳定的克隆效率。
4. 未纯化的PCR产物测试
结论：单片段无缝克隆试剂BR1C103对未经纯化回收的PCR产物具有良好的兼容性。1 kb和2 kb PCR产物可直接用于无缝克隆，在1 μL及0.25 μL投入条件下均获得充足菌落，阳性率均达到100%，整体表现与同类产品相当。该产品支持PCR产物免回收直接组装，在保证克隆准确性的同时，可简化操作流程、缩短实验时间，并减少纯化过程造成的样品损失，尤其适用于样品量有限及快速克隆等应用场景。
