Robustart Tth

Robustart Tth 是我公司开发的热启动 Tth 酶，既具有 5’-3’依赖于 DNA 模板的聚合酶活性，可广泛应用于各种 PCR 反应； 又具有在 Mn²+存在下，更高的高温反转录活性，能够有效消除 RNA 高级结构和低温条件下引物非特异性退火对 cDNA 合成 的不利影响，从而增加反转录的特异性，提高扩增的效率和产量，可以用来进行单酶一步法 RT-PCR 反应。Robustart Tth 在 常温下活性被封闭，特异性更好，能够显著增强低浓度模板的扩增效果。

1．5 U/µL Robustart Tth 

2．10×Tth RT Buffer Basic (Mn²+ free)（选配） 

3．25 mM Mn(OAc)₂（选配）

*10×Tth RT Buffer Basic (Mn²+ free)不含 dNTP 和 Mn²+，配制反应体系时请加入 dNTPs 和 Mn(OAc)₂使用。

1.  抗体修饰，90℃以上，30s-1min热启动。

2.  具有聚合酶和逆转录酶双功能活性。

3.  Mn²+存在下可进行60℃-70℃高温反转录，复杂RNA模板的反转录效率更高，降低非特异性。

4.  抑制物耐受性好。

1.  定量PCR。

2.  多重PCR、基因分型检测、 高灵敏度病毒检测。

1. 冻融稳定性验证

实验条件：

实验结果：

测试方法：将单酶冻融5、10、15、20次。以0次冻融为对照，在MD2011体系中进行扩增测试。

小结：在人基因组中检测，E17单酶在冻融5、10、15、20次后，扩增性能与未冻融试剂一致，能够保持稳定。

2. 加速稳定性验证

实验条件：

实验结果：

测试方法：将单酶加速7、14天。以0天加速为对照，在MD2011体系中进行扩增测试。

小结：在人基因组检测中，E17单酶放置在37℃加速7天、14天后，扩增性能与未加速试剂一致，能够保持稳定。

3. 运输稳定性验证

实验条件：

实验结果：

测试方法：将单酶顺丰航空快运运输84h后，以-20℃±5℃保存的试剂作为对照。在MD2031体系中进行验证

小结：E17在84h运输后较-20°C±5°C保存同批次样品，在人全血稀释的人基因组模板下，各通道下，ΔCT值差异均＜0.5；Rn%<10%，线性拟合度良好。

4. 抗抑制验证（口腔拭子直扩测试）

实验条件：

实验结果：

测试方法：棉签刮取口腔内壁左右两侧各10次，再于1 mL H2O中洗脱，2500 r/min下离心10 min，去上清，剩约100 μL，混匀后直接加样。

小结：E17能够对口腔拭子进行直接扩增，Ct值正常且扩增曲线良好。